ОПТИМИЗАЦИЯ TETRA-PRIMER ARMS-PCR СПОСОБА ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА СУБФЕРТИЛЬНОСТИ У БЫКОВ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ

Аннотация

Авторами работы были оптимизированы условия проведения TETRA-PRIMER ARMS-PCR реакции для детекции носителей синдрома субфертильности у быков-производителей разных пород зарубежной и отечественной селекции. Экспериментальным путем определена оптималь­ная концентрация прямого и обратного внешних и внутренних праймеров в количестве 1,0 мкл каждого праймера с конечным объемом реакционной смеси 25,0 мкл. Эффективным был следующий температурный режим: первоначальная денатурация при 95 °С -5 мин, на первом этапе амплификации количество циклов 17, денатурация при 94 °С – 30 сек, отжиг праймеров при 68°С- 30 сек, со снижением температуры на 1°С за каждый цикл, элонгация при 72 °С – 30 сек, следующие 30 циклов денатурация при 94 °С – 30 сек, отжиг праймеров при 51 °С – 30 сек и элонгация при 72°С -30 сек, заключительный синтез при 72°С -5 мин. Установлено, что изменение концентрации магния хлорида существенно не влияет на результативность процесса амплифи­кации гена TMEM95. Таким образом, оптимизированным TETRA-PRIMER ARMS-PCR способом были протестированы всего 223 племенных быков-производителей из трех племенных центров Республики Казахстан, выявлен один гетерозиготный носитель синдрома субфертильности, бык-производитель симметальской породы зарубежной селекции, встречаемость исследуемого генетического дефекта у быков-производителей была низкой и составила 0,44%.